PCR analýza: co je to? Jak správně provést test PCR

Ne tak dávno, spolehlivý,vysoce citlivou a rychlou metodu diagnostiky různých infekčních onemocnění člověka. Tato metoda se nazývá "PCR analýza". Co je to, co bude jeho podstata, jaké mikroorganismy to může odhalit a jak ji správně odevzdat, řekneme v našem článku.

Historie objevu

Vyvinul způsob polymerázové řetězové reakce (PCR)Americký vědec Cary Myullis v roce 1983. Původně patentoval metodu diagnostiky společnosti "Cetus Corporation", ve které jeho tvůrce pracoval. V roce 1992 však byla všechna práva a patenty prodána společnosti "Hoffman-La Roche". Potom se zdálo, že byly provedeny paralelně podobné studie a byly zaznamenány i jinými americkými biologymi, jako jsou Alice Chen, David Edgar, John Treel. V roce 1980 řešili tento problém sovětští vědci A. Slyusarenko, A. Kaledin a S. Gorodetsky. Proto nebylo možné určit jediného nositele práv. Mnoho vynikajících biochemiků přispělo k vývoji metody polymerázové řetězové reakce a patentovalo jejich inovace. V současné době se analýza PCR provádí všude ve speciálně vybavených laboratořích.

Podstata diagnostické metody PCR

PCR analýza: co to je a jak to funguje? Podstatou metody je zvýšení specifického mikrobiálního média pomocí speciálního enzymu DNA polymerázy za umělých podmínek. K tomu vynásobte stávající materiál DNA. Takže v přítomnosti patogenního mikroorganismu ve vzorku se jeho množství zvýší biochemickými laboratorními manipulacemi a bakterie nelze detekovat mikroskopem.

PCR analýza - co to je?

Jak probíhá materiálový výzkum?

Analýza vyžaduje:

  • Matrice DNA;
  • primery spojující konce části materiálu;
  • termicky stabilní enzym DNA polymerázy;
  • chemické látky, které zajišťují řádné fungování enzymů;
  • roztok pufru nutný k vytvoření vhodných podmínek pro růst a vývoj DNA materiálu.

    PCR analýza 12

K provedení PCR se provádí 25-30 opakování, sestávající ze tří fází: denaturace, žíhání a prodloužení.

Pro analýzu polymerázové řetězové reakcepoužijte speciální zařízení - zesilovač. Moderní zařízení umožňuje nastavit potřebný program pro vytápění a chlazení trubek, aby se při diagnostice odstranily chyby.

Kde se používá diagnóza?

Metoda polymerázové řetězové reakce se používá v různých oblastech medicíny:

  • Forenzní vědci ji používají k identifikaci genetického materiálu, jako jsou vlasy, sliny nebo krev;
  • PCR analýza krve pomáhá s genotypizací, například za účelem detekce individuální geneticky modifikované reakce na určitou drogu;
  • pomocí takové metody zjistí existence rodinných vazeb mezi lidmi;
  • nejpopulárnější metoda PCR se stala v lékařské diagnostice pro definici různých infekčních onemocnění.

Jaké infekce odhalují PCR?

Takže medicína dlouho a úspěšně použila analýzu PCR. Co je to, už jsme se naučili. A co patogeny mohou být detekovány s tím? Následující infekční nemoci jsou diagnostikovány metodou PCR:

  • hepatitida A, B, C;
  • ureaplasmóza;
  • Kandidóza;
  • chlamydia;
  • mykoplazmóza;
  • gardnerellez;
  • infekční mononukleóza;
  • trichomoniáza;
  • infekce papilomaviru;
  • tuberkulóza;
  • herpes infekce 1. a 2. typu;
  • Helicobacteriosis;
  • cytomegalovirus;
  • záškrtu;
  • salmonelóza;
  • HIV infekce.

    PCR analýza HIV

Také metody PCR se používají při diagnostice rakoviny.

Výhody

Diagnostická PCR má několik výhod:

  1. Vysoká citlivost. Dokonce i s několika málo molekulami DNA mikroorganismu analýza PCR určuje přítomnost infekce. Metoda pomůže při chronických a latentních onemocněních. Často v takových případech je mikroorganismus nekultivován jinými způsoby.
  2. Pro studium je vhodný jakýkoliv materiál, jako je slina, krev, pohlaví, vlasy, epiteliální buňky. Nejběžnější je krevní test a urogenitální nálek ​​na PCR.

    PCR: proveďte test

  3. Nevyžaduje dlouhodobé pěstování plodin. Automatizovaný diagnostický proces vám umožní získat výsledky studie po 4-5 hodinách.
  4. Metoda je téměř 100% spolehlivá. Byly zaznamenány pouze jednotlivé případy falešně negativních výsledků.
  5. Schopnost identifikovat několik typůpatogenů z jediného vzorku materiálu. To nejen urychlí proces diagnostiky onemocnění, ale také významně snižuje náklady na materiál. Lékař často předepisuje komplexní analýzu PCR. Cena vyšetření sestávající z definice šesti patogenů je asi 1500 rublů.

Doporučení pro přípravu analýzy

Aby výsledky byly spolehlivé ve studii PCR, analýza by měla být provedena na základě doporučení pro přípravnou diagnózu:

  1. Před oddáním slin byste měli před podáním materiálu upustit od jídla a léků 4 hodiny. Okamžitě před zahájením procedury opláchněte ústa vařenou vodou.
  2. Výše uvedená pravidla by měla být dodržována při odběru vzorku z vnitřního povrchu tváře. Po opláchnutí se doporučuje provést masáž lehké kůže, aby se izolovala sekrece žlázy.
  3. Moče se obvykle sklízí doma. Chcete-li to provést, musíte provést důkladné toalety genitálií. V sterilním plastovém obalu je nutné zachytit 50-60 ml moči. Aby byla zajištěna čistota materiálu, doporučuje se, aby ženy vložily do vagíny tampón a muži maximálně vytáhli pokožku. Materiál nemůžete převzít během menstruace.
  4. K spermatu se musíte zdržet sexuální aktivityAktivujte 3 dny před sběrem. Lékaři také doporučují, aby odmítli navštívit saunu a užívali horkou lázeň, konzumovali alkohol a kořeněná jídla. 3 hodiny před testem se musíte zdržet močení.
  5. Pro dodávání urogenitálního nátěru, například pokudje provedena analýza chlamýdiové PCR, u žen i mužů je doporučován sexuální odpočinek po dobu 3 dnů. 2 týdny před testem by neměly být užívány antibakteriální léky. Po dobu jednoho týdne musíte přestat používat intimní gely, masti, vaginální čípky a syringing. 3 hodiny před testem se musíte zdržet močení. Během menstruace se sbírka materiálu nevykonává, pouze 3 dny po ukončení vypouštění krve může trvat urogenitální rozetou.

PCR během těhotenství

V období očekávání dítěte mnoho infekčníchSexuálně přenosné nemoci jsou extrémně nebezpečné pro normální vývoj plodu. STD mohou vyvolat intrauterinní retardaci růstu, potrat nebo předčasný porod, vrozené vady dítěte. Proto je nesmírně důležité předat předčasný PCR test. Při registraci je nutné předložit analýzu - až 12 týdnů.

Analýza Chlamydia PCR

Plotový materiál pochází z cervikálního kanálupomocí speciální štětce. Postup je bezbolestný a nepředstavuje pro dítě žádné nebezpečí. Obvykle během těhotenství se chlamýdie analyzuje metodou PCR, stejně jako ureaplasmóza, mykoplazmóza, cytomegalovirus, herpes a papilomaviry. Takový soubor vyšetření se nazývá PCR-6.

PCR pro diagnózu HIV

V souvislosti se skutečností, že metoda polymerázové řetězové reakcereakce je velmi citlivá na změny v těle a podmínky diagnózy, mnoho faktorů může ovlivnit výsledek. Proto analýza PCR pro infekci HIV není spolehlivou metodou, její účinnost je 96-98%. Ve zbývajících 2 až 4% případů má test falešně pozitivní výsledky.

Ale v některých situacích bez PCR diagnostiky HIVneudržet. Obvykle se podává osobám s falešně negativním výsledkem ELISA. Takové ukazatele naznačují, že osoba dosud nevyvinula protilátky proti viru a nemohou být detekovány bez násobného zvýšení počtu. Toho lze dosáhnout provedením krevní testy metodou PCR.

Také tato diagnóza je nezbytná pro děti prvního roku života, které se narodily z HIV-pozitivní matky. Metoda je jediný způsob, jak spolehlivě určit stav dítěte.

PCR pro diagnózu hepatitidy

Metoda polymerázové řetězové reakce umožňujedetekuje DNA viru hepatitidy A, B, C dlouho před vznikem protilátek proti infekci nebo výskytu příznaků onemocnění. Zvláště účinná je analýza PCR pro hepatitidu C, protože v 85% případů tato nemoc probíhá asymptomaticky a bez včasné léčby přechází do chronické fáze.

PCR krevní test

Včasná detekce patogenu pomůže vyhnout se komplikacím a dlouhodobému léčení.

Komplexní průzkum PCR

Komplexní PCR analýza: co je to? Tato zkušební metoda polimezarnoy řetězovou reakci, která zahrnuje stanovení současně několik druhů infekce: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, Trichomonas, cytomegalovirus, Ureaplasma urealitikum, herpes 1. a 2. typu, kapavka papilomaviru. Cena této diagnózy se pohybuje v rozmezí od 2000 do 3500 rublů. v závislosti na klinických, materiálů a zařízení, jakož i na druhu analýzy: kvalitativní nebo kvantitativní. Co je potřeba ve vašem případě - lékař rozhodne. V některých případech stačí jednoduše detekovat přítomnost patogenu v jiných odvětvích, jako je HIV, důležitou roli, kterou hrají kvantitativní titru. jen „PCR analýza 12“ v diagnostice všechny výše uvedené zkoušky patogeny.

Vysvětlení výsledků analýzy

Dekódování analýzy PCR není obtížné. Existují pouze 2 stupnice indikátoru - "pozitivní výsledek" a "negativní výsledek". Pokud je patogen zjištěn, mohou lékaři potvrdit přítomnost onemocnění s 99% jistotou a pokračovat v léčbě pacienta. V kvantitativním způsobu stanovení infekce v odpovídajících sloupcích bude uvedena číselná hodnota zjištěných bakterií. Lékař může určit stupeň onemocnění a předepsat nezbytnou léčbu.

Kde projít analýzou PCR?

V některých případech, například při určováníHIV infekce metodou PCR, s negativním výsledkem, je nutné provést další vyšetření k potvrzení výsledků.

Kde provést analýzu?

Kde předložit analýzu PCR: ve státním polyklinickém nebo v soukromém laboratoři? Bohužel v obecních zdravotnických zařízeních jsou vybavení a metody často zastaralé. Proto je lepší upřednostnit soukromé laboratoře s moderním vybavením a vysoce kvalifikovaným personálem. Navíc v soukromé klinice získáte výsledky mnohem rychleji.

V Moskvě nabízí mnoho soukromých laboratoříprovádění analýzy PCR na různých infekcích. Například na klinikách jako Vita, Komplexní klinika, Šťastná rodina a Uro-Pro se provádí PCR analýza. Cena zkoušky je 200 rublů. pro definici jednoho patogenu.

Lze konstatovat, že diagnóza infekčníchPCR je ve většině případů rychlým a spolehlivým způsobem detekce patogenu v těle v časných stádiích infekce. Ale v některých případech stojí za to vybrat jiné metody diagnostiky. Potřeba provést takovou studii může stanovit pouze odborník. Dekódování analýzy PCR také vyžaduje profesionální přístup. Dodržujte doporučení lékaře a nevydávejte testy, které nejsou nutné.

Líbí se:
0
Rozbor moči u Nechiporenka. Jak jej sestavit
Obecná analýza moči. Jak si vzít a jaká je norma?
Jak se testuje okultní krve ve stolici?
Kde se má zaškrtnout analýza? Co dělat, když
Jak správně předat analýzu výkalů a zda je to nezbytné
Jak správně darovat krev hormonům?
Může být proveden krevní test na HIV
Jak správně předložit test moči?
Co bude znamenat analýza moči (dekódování)
Nejlepší příspěvky
nahoru